Микроскопическая техника

Определение "Микроскопическая техника" в словаре Брокгауза и Ефрона

Микроскопическая техника
Микроскопическая техника*

(I — в зоологии, гистологии и эмбриологии; II — в ботанике).
I. Задачи микроскопических исследований по отношению к животному царству распадаются на следующие главные группы: 1) изучение гистологического строения животного, 2) изучение анатомического строения животных, преимущественно мелких и недоступных исследованию с помощью грубых анатомических приемов, а равно и изучение анатомического строения таких органов, частей их или систем органов у относительно крупных животных, которые слишком малы для обыкновенного анатомического изучения, 3) изучение истории развития животных от стадии яйца до окончательной формы и 4) изучение физиологических отправлений животных. Кроме того, к методам М. техники прибегают и для других специальных целей, например для обнаружения и изучения таких растительных или животных организмов, которые живут в теле данного животного в качестве паразитов или в симбиозе с ним. Провести резкую границу между указанными 4 группами микроскопических исследований животных нельзя; не говоря уже о том, что при изучении всех простейших (Protozoa) все эти группы сводятся к исследованию единственной клеточки, из которой состоит тело этих животных, мы при изучении анатомическом или эмбриологическом попутно изучаем и строение клеточек, из которых построено тело животного. Однако соответственно неодинаковым целям и приемы исследования могут быть в частностях различны. При исследованиях гистологических собственно главное внимание сосредотачивается на изучении строения и взаимных отношений тех элементов (клеточек и их производных), из которых состоят те или другие ткани и органы животного. Вопрос об общем строении его, расположении, отношениях и происхождении разных систем органов не входит в круг исследования. Очень важную отрасль гистологии составляет тончайшее изучение основных черт строения и жизни клеточки вообще (цитология), откуда бы она ни была взята; сюда относятся вопросы о строении живой протоплазмы, ядра, о процессах деления клеточек и т. д. Существенно иная задача М. техники при анатомических исследованиях. Здесь главный вопрос — план строения органов, их расположение и взаимные отношения и, как общий выход, — общий план строения изучаемого организма. Гистологические подробности могут при этом играть совершенно второстепенную роль и к микроскопической технике прибегают главным образом для того, чтобы воспользоваться ее методами (и главным образом методом серий разрезов, см. ниже), с целью выяснения общей картины строения животного. При исследованиях эмбриологических гистологические подробности тоже имеют обыкновенно второстепенное значение (на них обращается внимание главным образом для того, чтобы различать элементы разного происхождения и назначения). Главная цель и здесь выяснить строение животного, но не в окончательном его виде, а в последовательных стадиях развития. Главную роль и здесь играет метод серий разрезов. Важную роль играет М. техника и в изучении физиологии животных. Физиологические отправления изучаются с помощью методов микроскопического исследования не только у тех животных, которые по самой величине своей недоступны иному исследованию, но и у всех вообще животных. М. техника дает возможность наблюдать те изменения, которые совершаются в клеточках и органах при их покое и деятельности, с помощью микрохимических реакций узнаются вещества, появляющиеся при этом в различных тканях; наконец, наблюдения под микроскопом живых тканей и клеточек позволяют непосредственно видеть, как совершаются некоторые жизненные отправления. К числу блестящих успехов в области изучения вопросов физиологии с помощью М. техники можно отнести, например, современные представления о жизни клеточек, открытие и исследование процессов фагоцитоза (см. Белые кровяные тельца, Кровь, Гистолиз), а также изучение выделительных органов путем введения в тело животного различных веществ и прослеживание их дальнейшей судьбы. Блестящее развитие М. техники в течение последних десятилетий оказало громадное влияние на все отрасли науки о животных и в частности чрезвычайно подвинуло изучение анатомии и эмбриологии животных. В случаях тонких гистологических исследований приходится прибегать к самым сильным увеличениям. Кроме сложных микроскопов, употребляемых для изучения препарата, весьма важны также лупы и микроскопы препаровальные, позволяющие удобно производить некоторые подготовительные операции при относительно малом увеличении. Необходимым дополнением к микроскопам являются микрометры, различного рода осветительные приборы, рисовальные приборы, приспособления для фотографирования микроскопических предметов, поляризационные приборы (для исследования под микроскопом двойного лучепреломления некоторых частей тканевых элементов) и др. Здесь будут рассмотрены в самых общих чертах лишь главнейшие типы методов М. техники.

Микроскопическому изучению могут, во-первых, подвергаться живые животные и живые ткани. Пресноводные микроскопические или очень мелкие животные могут непосредственно наблюдаться в пресной воде, морские — в соленой, но при этом, если наблюдение более или менее продолжительно, необходимо тщательно защитить их от высыхания (как полного, так и такого, которое могло бы вызвать изменение концентрации раствора солей, что приведет к смерти животного или ткани), вместе с тем необходимо обеспечить доступ воздуха (именно кислорода), чтобы защитить животное от задушения. Для этих целей прибегают к так называемым влажным камерам [Одна из влажных камер изображена в статье Дрожжи.] — это небольшие коробочки, прикрепленные к стеклу (на которое кладется при М. исследованиях изучаемый объект), смоченные внутри водой и прикрываемые сверху покровным стеклышком (тонкие стеклянные пластинки, которыми покрываются М. препараты). На покровное стеклышко помещают в капле воды или индифферентной жидкости (см. ниже) изучаемое животное или кусочки ткани, перевертывают его так, чтобы капля с животным висела на нижней стороне стекла и плотно закрывают им верхнее отверстие камеры. Животное или ткань таким образом защищены от высыхания и не лишены воздуха; можно поместить в камеру какую-нибудь зеленую водоросль, которая, выделяя на свету кислород, будет обеспечивать возможность дыхания на долгое время. Для различных специальных целей камеры могут устраиваться сложнее; так, если исследуются клеточки и ткани, принадлежащие теплокровным животным, то необходимо поддерживать все время нормальную для данного животного температуру. Для этого пользуются различного рода согревательными столиками: камера или пространство, куда вставляют предметное стекло с препаратом, нагревается теплой водой, циркулирующей в пространстве, окружающем боковые стенки камеры, а вставленный сюда термометр позволяет регулировать согревание. В некоторых случаях, чтобы замедлить движение быстро плавающих животных, к воде прибавляют какого-либо вязкого вещества. При изучении живых тканевых элементов можно или производить наблюдения непосредственно над клеточками, находящимися в теле животного, например в различных прозрачных животных, в хвосте головастиков и т. д. (при этом животное стремятся привести в парализованное состояние, чтобы оно движениями не мешало наблюдениям; для этого употребляется, например, кураре, эфир, никотин), или над отделенными от тела животного. В последнем случае вопрос о том, чтобы поставить элементы ткани в условия возможно близкие к нормальным, получает особенно важное значение. Производить наблюдения над тканями просто погруженными в воду нельзя, так как вода действует на них разрушительно, умерщвляя и уродуя клеточные элементы. Поэтому прибегают к индифферентным жидкостям, т. е. к таким, которые по возможности мало изменяют ткани. Для этой цели употребляют слабые растворы солей (например, водный раствор поваренной соли, содержащий около 0,5% соли), но эти жидкости все же не безразличны. Лучше для этой цели водянистая влага глаза, околоплодная жидкость (с прибавлением тинктуры йода она составляет весьма употребительную йодистую сыворотку) и т. п., частью искусственные жидкости, содержащие белок и соли. Как при изучении живых животных, так и при изучении живых тканей применяется иногда прижизненная окраска; для этой цели употребляются слабые водные растворы некоторых красок (например, хинолеин, метиленовая синь, Bismarckbraun и др.), но окрашивание, получаемое при этом, вообще весьма несовершенно.

По большей части микроскопическому изучению подвергаются мертвые ткани, и первая задача: возможно быстро убить и фиксировать ткани, т. е. подействовать на них такими реактивами, после действия которых строение тканей и клеточек сохранилось по возможности без изменений и притом настолько прочно, чтобы оно могло не изменяться от последующей обработки. В некоторых случаях необходимо прибегнуть к особым приемам, чтобы избежать сокращения элементов после того, как фиксирующий реактив начнет действовать. При этом или употребляют очень сильно и быстро действующие реактивы, например крепкие растворы сулемы холодной или нагретой (до 80° Ц.), или предварительно анестезируют животных табачным дымом, раствором никотина, хлороформом, эфиром, хлоралгидратом, водой с примесью спирта и т. д. В этом случай умерщвление и фиксация производятся лишь после достижения более или менее полной анестезии. Из многочисленных веществ, употребляемых для фиксации, следует отметить осмиевую кислоту в парах и водном растворе, осмиевую с хромовой, осмиевую с хромовой и уксусной, хромовую, хромовую с уксусной, хромовую с азотной (жидкость Perenyi), сулему в водном или алкогольном растворе, сулему с хлористым натром, уксусной кислотой и иногда квасцами (жидкость Ланга), пикриновую кислоту, пикриновую с серной (жидкость Клейненберга), абсолютный алкоголь, водные растворы альдегида муравьиной кислоты (формалина или формола) и т. д. Действие фиксирующего реактива иногда продолжается очень короткое время (несколько минут, даже часть минуты), в других случаях может без ущерба продолжаться целые дни. Во всяком случае затем необходимо удалить фиксирующий реактив, для чего употребляется промывание в воде, алкоголе или других веществах, смотря по реактиву. По окончании промывания препарат для придания ему большей плотности подвергается дальнейшему уплотнению с помощью различных реактивов, чаще всего спирта. При этом, во избежание вредного влиянии диффузии, стараются переводить объект из одной жидкости в другую весьма постепенно; так, если промывание происходило в воде, то объект постепенно переводят в алкоголь большей и большей крепости.

Для исследования химического состава различных составных частей клеточек тканей применяются микрохимические реакции; на изучаемый объект действуют такими реактивами, которые вызывают в известных веществах определенные, легко уловимые изменения (цветовые или иные). Если для изучения данной ткани необходимо изолирование ее элементов, то оно достигается или механическими приемами (главные из них: расщипывание иглами, встряхивание в пробирке и нанесение легких частых ударов по покровному стеклу, прикрывающему исследуемый объект), или химическими. Последние заключаются в вымачивании (мацерации) в различных жидкостях, которые действуют главным образом на вещества, связывающие клетки между собой (например, 30-градусный алкоголь). Иногда применяется также дигерирование, т. е. переваривание ткани с помощью пищеварительных соков животных (желудочного, поджелудочного), искусственно приготовленных из соответственных органов. Так как различные ткани различно относятся к действию пищеварительных соков, то этим способом можно изолировать некоторые части исследуемого органа.

За уплотнением следует обыкновенно окрашивание (при методе разрезов оно может производиться и позднее). Различают два рода окрашивания. 1) Общее или диффузное, когда окрашивается равномерно весь объект. Это окрашивание в настоящее время все более и более выходит из употребления; применяется оно, например, для обнаружения очень тонких перепонок или, в соединении с окраской следующей категории, в качестве фона. 2) Элективное, когда окрашивается лишь известная ткань, например нервные окончания (специфическая или гистологическая элекция), между тем как остальная масса объекта остается неокрашенной, или известные части клеточек, обыкновенно ядра (элекция цитологическая); обыкновенно стремятся окрасить и ядра, благодаря чему легко различается и расположение клеточек (и их границы). При самом окрашивании применяются два способа: или действуют такой краской, которая скорее окрашивает ядра, чем остальные части, и прекращают окрашивание, достигнув надлежащего цвета ядер (прямое или прогрессивное окрашивание), или окрашивают сильно весь объект, а затем извлекают краску (открашивание), которая скорее удаляется из протоплазмы, чем из ядер (регрессивное окрашивание). Число различных красок, употребляемых при микроскопических исследованиях, чрезвычайно велико; некоторые из них употребляются в виде водных растворов, часто с примесью некоторых солей или кислот, другие в виде растворов в алкоголе. Главные группы этих красок: 1) кармины (особенно борный кармин, представляющий алкогольный раствор кармина и буры, "Carmalaun" Майера — водный раствор карминной кислоты и квасцов, квасцовый кармин — "Alaun Carmin" Гренахера, приблизительно того же состава, пикрокармин и др.); 2) различные растворы гематоксилина и его производных и 3) минеральные краски: а) анилиновые, b) производные нафталина и с) производные антрацена. Нередко применяют комбинированные окраски, причем ядро окрашивается в один цвет, протоплазма в другой; иногда производят очень сложные окраски, причем различные части одной клеточки окрашиваются в несколько разных цветов; особенной сложности достигают методы окраски при изучении тончайшего строения протоплазмы и ядра. От окрашивания собственно следует отличать импрегнацию, сущность которой в том, что в известных частях ткани происходит восстановление солей тяжелых металлов (серебра, золота, осмия, палладия, железа) и образуется осадок металла, который и окрашивает соответственные части тканей. Импрегнация дает или негативные картины, когда, как, например, при действии азотнокислого серебра, металлический осадок образуется на границах клеток, в межклеточном веществе, благодаря чему резко выступают границы клеток (этот способ позволяет прекрасно различать границы клеточек эпителия), или позитивные, когда осадок, как, например, при действии хлористого золота, образуется в самых элементах ткани. Если препарат не предполагается разложить на ряд тонких разрезов, а изучать целиком, то после удаления краски его просветляют, пропитывая веществами, которые делают его более прозрачным (глицерин, гвоздичное масло и т. п.). Пропитывание его этими веществами производится с большой осторожностью, а выбор их определяется тем, в каком виде желают сохранить препарат. Так, препарат, пропитанный глицерином, должно и сохранять в глицерине (или в глицерин-желатине — смеси глицерина с желатином); если же имеется в виду заделать его в канадский бальзам (наиболее обыкновенный способ), то просветлению предшествует обезвоживание препарата посредством действия алкоголя большей и большей крепости, а затем препарат пропитывается таким веществом (гвоздичное масло, ксилол и т. д.), которое смешивается с бальзамом и позволяет ему вполне пропитать препарат. Препарат, находящийся на стеклянной пластинке (предметное стекло), прикрывается тонкой стеклянной пластинкой (покровное стекло), если он заключен в глицерин, глицерин-желатин и т. п. вещества, то края покровного стекла обмазывают каким-либо лаком. В некоторых случаях между покровным и предметным стеклами делаются ножки (восковые шарики и т. п.), чтобы защитить препарат от раздавливания при высыхании вещества, в которое он заключен.

В высшей степени важное значение в современной микроскопической технике имеет метод серий разрезов. При изучении объекта целиком, даже прозрачного или хорошо просветленного, мы можем составить себе лишь весьма неполное понятие о его строении; правда, кроме наружного вида объекта, мы можем, опуская несколько трубу микроскопа, получать так называемые оптические разрезы его на разной высоте; но способ этот весьма несовершенен и может подать повод ко многим ошибкам. Ввиду этого необходимо приготовлять действительные разрезы объекта. Для этой цели препарат заключают в какую-либо массу, которая пропитывает его, и затем режут эту массу вместе с объектом бритвой от руки или с помощью микротома, стараясь получить тонкие срезы. В настоящее время разрезы производятся почти исключительно с помощью микротомов. Сущность устройства их заключается в том, что заключенный ("залитый") в какую-либо плотную, хорошо режущуюся массу препарат постепенно подвигается по большей части с помощью микрометрического винта, и бритва, укрепленная в особенной оправе, срезает очень тонкие пластинки препарата. Конструкции микротомов весьма многочисленны; в одних объект перед каждым разрезом передвигается по наклонной плоскости, а бритва передвигается (рукой) по горизонтальной, в других бритва неподвижна, а объект выдвигается и надвигается на бритву, и т. д.

Микротом (одна из простейших конструкций): a — подставка, в которой укрепляется на пробке разрезаемый, залитый объект; б — наклонная плоскость, по которой, с помощью микрометрического винта (в), движется подставка; г — гайка для прикрепления бритвы (бр) к подставке, движущейся горизонтально. Один из так называемых санных микротомов (Schlittenmikrotom).

Главное достоинство метода заключается, во-первых, в большой тонкости разрезов (а именно при заливке объекта в парафин предельная тонкость разрезов принимается в 0,001 мм, при заливке в целлоидин — 0,007 мм), во-вторых — и это наиболее существенно — мы можем с помощью микротома изрезать весь объект в каком угодно направлении на серию тонких пластинок и сохранить все эти пластинки, наклеив их в последовательном порядке на предметное стекло. Просматривая такую серию разрезов, мы можем без затруднения уловить самые тонкие подробности строения данного животного (взрослого или зародыша) или органа. Метод серий разрезов применяется даже к простейшим, и серии разрезов через инфузорий дали некоторые весьма существенные результаты по отношению к строению этих животных. Некоторые микротомы имеют приспособления, позволяющие получать серию разрезов в виде длинных лент (разрезы по мере срезания постепенно переходят на шелковую ленту, с которой и снимаются затем в виде длинных полос); этот прием (отчасти приложимый и к обыкновенным микротомам) чрезвычайно ускоряет работу. Подготовительные операции для приготовления разрезов обыкновенно следующие: фиксированный и отвердевший объект, окрашенный или неокрашенный (в последнем случае красятся приготовленные из него и наклеенные на стекло разрезы), постепенно обезвоживается алкоголем, переводится в гвоздичное или кедровое масло и т. п. Пропитанный одним из этих веществ, объект переводится в расплавленный парафин на более или менее продолжительное время (в термостате); парафин с объектом затем помещается в коробочку из бумаги, на дно которой положено чистое предметное стекло, и здесь застывает. Положение объекта в парафине видно сквозь гладкую нижнюю поверхность затвердевшего парафина. Из последнего вырезают подходящей формы кусок, в котором заключен объект, прикрепляют к соответственной части микротома и режут. Употребляются и другие вещества для "заливания" препаратов, предназначаемых для разрезов, особенно целлоидин, коллодион, фотоксилин. В этом случае хорошо обезвоженный алкоголем объект помещают в раствор названных веществ в смеси равных количеств эфира и абсолютного алкоголя, медленным испарением дают массе несколько затвердеть, а затем оканчивают уплотнение с помощью алкоголя градусов около 85. Приготовленные разрезы наклеивают последовательными рядами на предметное стекло, смазанное каким-либо клейким веществом (например, смесь коллодия с гвоздичным маслом, белок и др.), удаляют парафин каким-либо растворителем, например ксилол, скипидар (если же препарат был залит в целлоидин, то эта операция оказывается излишней), затем, как было указано выше, заделывают препарат в канадском бальзаме. Если объект не был предварительно окрашен, то красят наклеенные на стекло серии разрезов.

Кроме перечисленных главных групп приемов исследования, М. техника располагает и многими специальными приемами. Таков, например, метод инъекций. Для того чтобы сделать видимыми тонкие канальцы и полости — их наполняют с помощью шприца или иных более сложных приборов различными окрашенными жидкостями; чаще всего жидкости эти заключают какое-либо вещество, способное застывать (например, желатин), что обеспечивает возможность изучения инъецированного органа и на разрезах. Иногда производится одновременно инъекция разных систем полостей и каналов данного органа массами различно окрашенными. В подробностях методы инъекций, как и другие методы М. техники, представляют большое разнообразие. Иногда нужно бывает удалить известь, отложенную в изучаемой ткани (костях, различных скелетных образованиях беспозвоночных, панцирных и т. д.), "декальцинировать" эту ткань, для чего лучше всего прибегать к действию слабого раствора кислоты (обыкновенно хлористо-водородной) на фиксированный и уплотненный уже объект. В случае необходимости удалить кремнезем (например, скелет многих губок, радиолярий) действуют плавиковой кислотой. Если ткань сильно пигментирована, ее обесцвечивают действием хлора и т. п. веществ. Для приготовления тонких, удобных для М. исследования пластинок из весьма твердых образований без удаления их минеральных составных частей (исследование костей, известковых игл и пластинок, кораллов и т. д.) кусочки этих предметов шлифуют, пока не получатся пластинки достаточно тонкие. Подробности М. техники сильно изменяются в зависимости от объекта исследований.

Новейшую, весьма полную и подробную сводку методов М. техники (без описания микротомов и микроскопов) можно найти у Bolles Lee et Henneguy, "Trait é des Mé thodes techniques de l'Anatomie microscopique" (2 изд., П., 1896); более старые и менее полные данные, но соединенные с описанием и рисунками главнейших приборов, находятся в изданном под редакцией М. Д. Лавдовского и Ф. В. Овсянникова коллективном труде ряда профессоров, доцентов и врачей: "Основания к изучению М. анатомии человека и животных" (СПб., т. I, 1887; т. II, 1888). См. также: Artur Bolles Lee, "The Microtomist's Vade-Mecum" (Л., 1893); Behrens, "Tabellen z. Gebrauch bei mikrosk. Arbeiten" (Брауншвейг, 1892); Александр Бэм и Альберт Оппель, "Compendium микроскопической техники", перевод Ф. В. Семенова (СПб., 1892); Никифоров, "Краткий учебник микроскопической техники" (М., 2 изд., 1888).

Н. Кн.

II. Основные приемы М. исследования растений в существенных чертах сходны с приемами зоологической М. техники (см. выше). Очень маленькие микроскопические растения и части более крупных рассматриваются в капле жидкости, опущенной на предметное стекло и покрытой сверху тоненьким покровным стеклышком. В живом состоянии М. растения (грибы, водоросли и др.) исследуются лучше всего в каплях той жидкости, в которой они растут; при менее продолжительных исследованиях можно пользоваться обыкновенной водой, но не дистиллированной. Чтобы покровное стеклышко не раздавило объект исследования (препарат) и вместе с тем устойчивее держалось на предметном стекле, его снабжают по углам маленькими восковыми ножками (попросту — подмазывают углы снизу мягкой пластической смесью воска с венецианским терпентином). Для более продолжительных наблюдений объект помещают в висячей капле во влажную камеру (см., например, камеры, описанные в ст. Бактерия и Дрожжи). Весьма просто можно устроить удобную влажную камеру таким образом. Из папки (около 2 мм толщиной) вырезывают кусок, размером несколько меньше предметного стекла, и в середине его делают отверстие, немного меньше покровного стеклышка. Такие куски (рамки) папки опускают в кипяток, потом влажными накладывают на предметные стекла, а отверстие в папке прикрывают покровным стеклышком, на нижней поверхности которого в висячей капле находится растение. Рамку из папки необходимо постоянно поддерживать влажной. Находящиеся в таких камерах растения защищены от высыхания и вполне обеспечены воздухом. Сухие растения для М. исследования предварительно размягчаются или развариваются в воде или глицерине. Для разъединения и изоляции клеток прибегают к мацерации растений или их частей — к размачиванию их, развариванию или обработке разведенными кислотами и щелочами. В других случаях, например для изоляции элементов древесины (см. Древесина, Межклетное вещество), необходимо применить более энергичные реактивы: хромовую кислоту или смесь Шульце (азотную кислоту с бертолетовой солью). Если нужно вызвать разбухание, например для рассмотрения некоторых особенностей строения клеточной оболочки или крахмальных зерен, то пользуются едким кали различной крепости. Тот же реактив, наряду с концентрированным раствором хлоралгидрата и жавелевой водой, служит для просветления органов и тканей, т. е. для придания им большей прозрачности. Средства эти одинаково применимы как к свежему материалу, так и к засушенному или сохраняемому в спирту. Другую категорию просветлителей составляют вещества, сильно преломляющие свет: глицерин, различные эфирные масла, бальзамы и смолы, в особенности канадский бальзам и даммар-лак. Особенно важное значение они имеют для окрашенных препаратов, для просветления которых не применимы вещества первой категории, обыкновенно вредно действующие на краски. Так как упомянутые бальзам и лак с водой совершенно не смешиваются, то препарат нельзя прямо из воды или водного раствора переносить в них, а нужно его предварительно обезводить, что достигается посредством алкоголя; но так как и алкоголь не смешивается с бальзамом или лаком, то его нужно вытеснить, переместив препарат в ксилол, гвоздичное, масло и т. п. вещества, уже вполне смешивающиеся с канадским бальзамом. Практические указания относительно всех этих манипуляций можно найти в специальных руководствах по М. технике (например, в книге Циммермана). Так как в живом состоянии многие существенные стороны строения тканей и клеток (по причине прозрачности или чаще незначительных различий в светопреломлении) неясны или совершенно невидимы, то весьма часто в гистологии растений, как и в гистологии животных, прибегают к окраске препарата. Окраска может быть прижизненной; для этого обыкновенно употребляют некоторые анилиновые краски, сильно разведенные. Гораздо чаще окрашивают предварительно убитые и фиксированные (ср. выше М. техника в зоологии) растения или их части. Как фиксирующих, так и окрашивающих веществ в М. технике применяется чрезвычайно много. Вообще фиксатор тем лучше, чем быстрее он действует и чем совершеннее закрепляет существующее при жизни строение тканей и клеток. Наиболее употребительные фиксаторы: алкоголь, йод-алкоголь, водные и спиртовые растворы сулемы, осмиевая кислота в растворе и в парах, пикриновая кислота, хромовая кислота — одна и в комбинации с другими кислотами. Перед окраской фиксатор должен быть тщательно отмыт, иначе окраска может не удаться. Из красящих веществ всего больше в ходу различные растворы гематоксилина (гематоксилин Делафильда, Бемера и др.), кармина (борный, уксусный кармин и др.) и многие анилиновые краски: метиленовая синь (синька), йодная и метиловая зелень, фуксин и др. Выбор фиксатора и краски и продолжительность их действия (от нескольких секунд до нескольких дней) зависит от объекта и от цели исследования. При окраске нередко употребляют протравы, например квасцы и др. Иногда фиксирование ведут одновременно с окраской. Окраска бывает равномерной, диффузной, но чаще применяют и гораздо более важное значение имеет (особенно при изучении растительной клетки) дифференциальная и элективная окраска (ср. выше М. техника в зоологии). При двойной окраске — одни элементы тканей или клетки окрашиваются в один, другие — в другой цвет. Для изучения строения растений весьма часто приходится пользоваться методом разрезов, т. е. вырезывать из растения (или его части) в различных направлениях тонкие пластинки, настолько тонкие, чтобы можно было их рассматривать под микроскопом в проходящем свете. Прежде такие пластинки или, как их называют, разрезы делались исключительно от руки бритвой, но в последнее время получил широкое распространение способ заливки в парафин (реже в другие вещества) и резания на микротоме (см. выше). Технические приемы микротомной техники мало отличаются от применяемых в зоологии; они требуют упражнения и навыка, трудно усваиваются из книг, гораздо легче под личным руководством. Чтобы препараты могли сохраняться более продолжительное время (постоянные препараты), их заключают в различные консервирующие вещества; окрашенные препараты в канадский бальзам или даммар-лак, неокрашенные — в глицерин или глицерин-желатин (последний перед заключением в него препарата предварительно разжижают легким нагреванием). Нежные препараты сначала помещают в каплю слабого (5—10%) глицерина, затем ждут, пока (вследствие испарения воды) глицерин сгустится, и лишь тогда прибавляют каплю жидкого глицерин-желатина. Для еще большей безопасности постоянного препарата края покровного стеклышка обмазываются особым лаком. Химический состав М. объектов изучается при помощи микрохимических реакций. Как микрохимическими пользуются такими реакциями, при которых происходят хорошо заметные глазу изменения, например появление окраски, образование кристаллического или аморфного осадка, растворение, разбухание и т. п. Учение о микрохимических реакциях и их применении в ботанике составляет особый отдел ботанической микротехники — ботаническую микрохимию. Некоторые более важные микрохимические реакции указаны при описаниях различных растительных веществ (ср. Клетчатка, Крахмальные зерна, Белок и др.). Дальнейшие подробности относительно микрохимии (см.), равно как и относительно исследования растений в поляризованном свете, можно найти в нижеуказанных сочинениях. О М. технике при исследовании бактерий — см. Бактерии.

Литература. С. N ä geli und S. Schwendener, "Das Mikroskop" (2 изд., 1877); L. Dippel, "Das Mikroskop und seine Anwendung" (2 изд., I т., 1883; II т., 1896); E. Strasburger, "Das botanische Praktikum" (2 изд., 1887); его же, "Kleines botanisches Praktikum" (2 изд., 1895; перевод С. Навашина с 1 изд. этой книги, под заглавием: "Краткий практический курс растительной гистологии для начинающих", М., 1886); A. Zimmermann, "Die botanische Mik r otechnik" (1892); A. Циммерман, "Микроскоп. Руководство для научной микроскопии" (1896); H. Ambronn, "Anleitung zur Benutzung des Polarisationsmikroskops" (1892). См. также литературу выше, при ст. М. техника в зоологии.

Г. Н.